免疫分析方法检测生物制品中HCP残留的开发策略

在上一篇文章中我们介绍了在开发HCP的ELISA分析方法中的开发周期、抗原制备、抗体制备与表征。在这篇文章中，我们继续给大家介绍HCP ELISA方法学的开发以及君研生物的整体解决方案。                   

一. 不同ELISA检测方法对比

ELISA是各国药典推荐用于检测生物制品中残留宿主细胞蛋白(HCP)的方法，能够测定HCP的总量。然而，ELISA存在局限性，无法区分HCP的种类及其丰度，因此需要其他检测方法来补充其不足。每种检测技术都有其独特的优势和不足，在实际应用中，应根据实验目标、样品特性、所需准确度以及操作的便捷性等因素，选择并结合使用不同的方法，以获得更全面和精确的检测结果。

此外，美国药典USP<1132>和欧洲药典EP 2.6.34. HOST-CELL PROTEIN ASSAYS明确指出，在产品开发的不同阶段，建议使用不同的ELISA试剂盒进行HCP检测。它们将HCP检测方法分为三类：商业化试剂盒、产品/工艺特异性方法和平台化方法。

二. ELISA方法开发与验证

在我们获得抗原以及多克隆抗体之后，就可以开始ELISA的方法开发。开发一般分为了五个部分，从而实现从原材料筛选到方法建立，最后到规模化生产的流程。

2.1原材料相关

包括原材料（如抗体及其他试剂）的制备与筛选。HCP的抗体有时会涉及到抗体池，即抗体制备时采用多种动物免疫策略等，最终收获多个HCP抗体，那此时需要将抗体进行组合筛选，通过抗体覆盖率、效价、初步ELISA实验表现等综合评估，最终选择其中效果最好的一组进行后续开发。制备不同类型的稀释用缓冲液，用于稀释和保存抗原/抗体。通过实验确定最佳的包被缓冲液，提高抗原/抗体在固相载体上的结合效率。选择合适的封闭液，减少非特异性结合，提高信号背景比。

2.2方法学建立建立

ELISA的基本操作步骤和条件，形成初步的方法学。确定最佳的包被浓度、时间和温度，确保抗原/抗体在固相载体上的均匀分布。优化洗涤次数和洗涤缓冲液，去除未结合的物质，减少非特异性干扰。确定最佳的孵育时间、温度和振荡条件，确保抗原/抗体的充分结合。优化显色时间和终止液的选择，确保显色反应的稳定性和可重复性。选择合适的酶标仪和读取波长，确保数据的准确性和可靠性。

2.3方法学验证验证

建立的方法学是否满足预期的性能要求。通过交叉反应实验，验证抗原/抗体的特异性，确保无交叉反应。通过标准曲线法，测定方法的最低检测限（LOD）和定量下限（LLOQ）。通过多点稀释实验，验证方法的线性范围。通过重复性和再现性实验，验证方法的精密度。通过回收率实验，验证方法的准确性。通过长时间放置实验，验证试剂盒的稳定性。

2.4方法学确认确认

方法学在实际应用中的适用性和可靠性。使用针对项目的不同工艺步骤的样品或不同基质的样品，验证方法学的适用性。通过多批次试剂盒的测试，验证批间一致性。与已知的标准方法进行比对，验证方法的可靠性和一致性，并及时发现和解决问题。

2.5规模化生产

将验证和确认的方法学应用于大规模生产，确保产品质量和稳定性。根据小规模实验结果，优化生产工艺参数，实现大规模生产。建立严格的质量控制体系，确保每一批次的产品都符合质量标准。详细记录生产过程中的关键参数和数据，确保可追溯性。定期进行稳定性测试，确保产品在有效期内的性能稳定。采用合适的包装材料和运输方式，确保产品在运输过程中的安全和完整性。

三. 君研生物解决方案

君研生物拥有成熟且全面的技术平台，可以提供针对不同宿主细胞HCP检测的定制化开发服务。依托高效的抗体研制平台和先进的研发仪器设备，公司实现了从HCP抗原表征、高覆盖率HCP抗体制备分析、分析方法开发验证到试剂盒规模化生产的全流程服务，确保高质量的HCP ELISA检测试剂盒的开发和稳定供应。我们对技术的不懈追求和对质量的严格把控，旨在为您提供安心、高效的服务体验。

• 采用高分辨LC-MS法对抗原进行全方位表征，获取HCPs身份信息。

• 丰富的HCP抗体制备经验，采用多种策略组合，保证高质量抗体获得。

• 使用先进的AAE-MS抗体覆盖率检测平台，对抗体进行表征。

• 按照中国药典、ICH等标准进行完整的方法学验证，符合申报注册。

• 严格遵循ISO13485 质量体系进行开发和转产，接受客户现场审计。

• 专业技术团队全流程服务，实时汇报沟通项目进展

四. 通用型HCP检测试剂盒

为了更好地满足生物制品检测要求，加速生物制品工艺优化以及安全放行，君研生物自主研发了支持商业化的高覆盖HCP检测试剂盒，包含CHO HCP残留检测试剂盒、E.coli表达菌HCP残留检测试剂盒。所有试剂盒均经过完整的方法学验证，确保性能稳定可靠。

• 制备工艺完善：标准品的代表性（细胞及工艺），充分表征；

• 抗体覆盖率高：高达86%，总量多，满足产品全生命周期；

• 检测方便快捷：使用一步法，只需2.5h 左右即可出结果；

• 特异性强：与BSA、Protein A、E. coli HCP无交叉反应；

• 供货稳定：产品自研自产，保证供货周期。

• 标准品制备：选用有工艺代表性的标准品，覆盖常见高风险因子；

• 抗体覆盖率高：高覆盖率抗体（>88%）、总量多，总量满足5-10年内使用；

• 检测方便快捷：使用一步法，只需2.5h 左右即可出结果；

• 特异性强：经过多种样本基质验证，与常见工艺杂质无交叉反应。

• 供货稳定：产品自研自产，保证供货周期。