生物制品安全性之支原体检测试剂盒

关于支原体

支原体（mycoplasma）是一类没有细胞壁、高度多形性、能通过滤菌器、可用人工培养基培养增殖的最小原核细胞型微生物，大小为0.1～0.3微米。由于能形成丝状与分枝形状，故称为支原体。

支原体是实验室中常见的污染源，据统计约有 15%-35%的细胞被支原体污染。污染的主要来源有：

• 工作环境污染

• 操作者本身污染

• 培养基污染

• 污染支原体的细胞造成的交叉污染

• 实验器材带来的污染

• 制备细胞的原始组织或器官的污染

支原体污染会改变细胞内DNA、RNA及蛋白表达，改变宿主细胞的结构和功能，影响细胞代谢和生长，具有干扰病毒复制的不利影响。

法规及指导原则

培养法和指示细胞法在实际应用中，存在检测周期较长的缺点，不满足有效期短的产品或需要快速放行的中间品。君研生物为了寻求既满足法规检测需求，又快速方便的检测方式，开发了支原体检测试剂盒。

支原体检测试剂盒

君研生物自主研发的支原体 DNA（qPCR）检测试剂盒专一性强，灵敏度高，可用于定性检测主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞以及临床治疗用细胞中是否存在支原体污染，可与君研生物“宿主细胞残留 DNA（磁珠法）样本前处理试剂盒”以及全自动核酸提取仪配套使用。本试剂盒的优势在于可覆盖 150 多种支原体检测，检测限、精密度、耐用性好、专属性强。

产品性能

• 检测限

10CFU/mL口腔支原体、猪鼻支原体、肺炎支原体等多种支原体标准菌株的检出率为100%。

• 空白限

将DNA稀释液作为样本直接检测，共计做24次提取并检测，样本均未被检出。

• 精密度

对同一份支原体阳性参考品平行测定十次，检测结果均为阳性，Ct值的变异系数≤5%。

• 专属性

将常见生物制品（如：Human、Vero、CHO、HEK293、E.coli、毕赤酵母等）300 pg/μL基因组DNA作为样本进行提取检测；其他工程菌（如嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌等）DNA作为样本进行提取检测，均无检出；将PBS、10%胎牛血清等阴性基质作为样本进行提取检测，无检出。

• 耐用性

支原体标准菌株在不同稀释基质（如DMEM培养基、CHO无血清培养基等）、产品冻融，产品运输、多种机型改变（如ABI 7500，Bio-Rad CFX Opus96，Roche LightCycler 96 等）情况下均可以稳定检出。

• 联合验证

与第三方机构合作，在欧洲药典指导下，用培养法、指示细胞培养法和qPCR的同步实验分别检测10CFU/mL、100CFU/mL 的口腔支原体和肺炎支原体，进行可比性研究。

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