生物制品中残留DNA片段的检测分享

       在国家药品监督管理局部署下，2022年5月份药审中心发布了《体内基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则(试行)》中，首次将风险性DNA残留片段的大小控制在200bp以下进行明文规定，“生产若使用了肿瘤细胞系（如 Hela 细胞）、 致瘤细胞系，或携带有致瘤基因、病毒来源序列的细胞（如 HEK 293T 细胞）， 在确保无完整活细胞残留的同时，需对 DNA 的残留量和残留片段大小进行控制，合理拟定标准限度。如有可能，建议尽量将残留 DNA 控制在 10ng/剂以内，DNA 残留片段的大小控制在 200bp 以下”。

       早在2010 年 FDA发布的生物制品相关指导中,就提到可通过降低残留DNA 的含量、减小残留DNA 片段的大小（如核酸酶降解处理）至功能基因大小以下，在终产品中需要检测残留DNA 的含量和片段大小分布情况。研究表明，一个功能基因至少在200bp 以上，因此，为减少残留DNA 风险，FDA建议残留 DNA片段不大于 200bp。

       那么，宿主细胞残留 DNA 片段大小应该用什么技术平台进行检测呢？

01 毛细管阵列+电荷耦合检测器 (CCD)

       武汉生物制品研究所发表的使用毛细管电泳平台分析宿主细胞残留 DNA 片段大小的方法验证文章中展示了CCD技术用于宿主细胞残留 DNA 片段大小分析的研究。

02  毛细管凝胶电泳+激光诱导荧光检测器（CGE-LIF）

       毛细管凝胶电泳与敏感激光诱导荧光（CGE-LIF）检测残留DNA分子大小的方法，可以检测生物制品中残留DNA的大小，可检测50 bp-1000 bp的片段大小，且可进行条件优化检测长至15 kb的片段大小。灵敏度可达10 pg/mL的片段浓度。

03 实时荧光定量PCR法（qPCR法）

       实时荧光定量PCR（qPCR）法也被用于进行生物制品中生产用细胞相关的DNA片段分布的分析。检测宿主细胞残留DNA含量的方法都相对成熟，而且药典法规也有明确规定，在《中华人民共和国药典》2020年版第三部中也推荐使用定量PCR法。qPCR法相比于CCD和CGE-LIF，有操作更简单，耗时更短，且与宿主细胞残留DNA含量检测值具有很好的一致性和可对比性等优势。

针对以上，君研生物自主研发了一系列宿主细胞残留DNA片段分析试剂盒，采用荧光探针qPCR法原理，用于定量检测样本中宿主细胞残留DNA片段的大小分布情况分析。

       Vero细胞系是病毒类疫苗生产常用一种永生细胞系，宿主细胞的残留的DNA存在感染性、免疫原性或致癌性等。对于残留DNA的最大可承受量为10ng/剂，而对于DNA大小片段的要求则为小于最小功能基因大小200bp，大于200bp以上的片段其潜在风险较大，测试在成品中的残留DNA片段大小的分布情况对于疫苗生产企业十分必要。

       君研生物自主研发的Vero残留DNA片段（qPCR）检测试剂盒可用于定量检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中Vero宿主细胞DNA残留片段大小分布，利用PCR荧光探针法原理，快速、特异地检测DNA片段的分布情况。该试剂盒可配套我公司宿主残留DNA样本前处理试剂盒使用。

       人源系列的细胞（如HEK293、293T、Hela、Human等）广泛应用于基因表达、蛋白生产、慢病毒、逆转录病毒及腺病毒的包装等。君研生物自主研发了一系列人源细胞残留DNA片段（qPCR）检测试剂盒，可用于定量检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中人源细胞宿主DNA残留片段大小分布，利用PCR荧光探针法原理，快速、特异地检测DNA片段的分布情况。该试剂盒可配套我公司宿主残留DNA样本前处理试剂盒使用。

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关于君研生物

       君研生物科技（山西）有限公司成立于2021年，作为独立创新的研发、生产和销售一体型企业，君研专注于为生物医药产业提供符合国际标准的质量安全检测产品和服务。公司位于山西省太原市综改示范区，由海归科学家与业内资深专家领队，建设有 ~3200 平米符合 cGMP 标准和 ISO 13485:2016 体系要求的研发生产基地。

       君研生物致力于在CGT药企、抗体药、疫苗等领域提供专业合规的工艺杂质残留、宿主细胞核酸及蛋白残留、含量测定、外源污染物检测等产品和服务。结合医药产业发展需求，公司特色的快速即用型检测开发技术已经覆盖20多种检测试剂盒系列产品，拥有专利类知识产权 10 余项。作为助力您成功的生物安全检测合作伙伴，君研生物始终坚持生物原料中国造，为生物医药安全提供国际品质的产品和专业的技术服务。

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