新品上市 | PG13细胞生产纯化过程中残留DNA的检测

       PG13细胞系是由小鼠胚胎成纤维细胞（N1H3T3）整合莫洛尼氏白血病毒（MLV）表达载体和长臂猿白血病病毒（GALV）胞膜蛋白基因改造而获得的。PG13细胞作为一种包装细胞目前主要应用于细胞产品（如CAR-T/TCR-T细胞等）的开发。通常采用PG13细胞包装逆转录病毒，生产逆转录病毒载体，再侵染患者T淋巴细胞，制成细胞制剂从而实现基因治疗和细胞治疗。

       作为生产逆转录病毒载体的主要包装细胞，PG13在生产和纯化过程中可能存在细胞衍生、残留的宿主细胞DNA杂质，这些残留DNA存在潜在的致癌风险，因此从安全角度考虑，需要对产品的PG13细胞DNA残留的含量和浓度进行检测。对此各国也对宿主细胞DNA残留做了相关规定。

• WHO和美国FDA现行指导方针推荐成品中残留DNA不高于10 ng/剂，长度不大于200 bp。美国FDA发布的指导原则中指出生物制品宿主细胞DNA残余限度为100 pg/剂，对于大剂量生物制品如单克隆抗体，根据其残留DNA来源及给药途径，DNA残留量可放宽至10 ng/剂。

• 欧洲药典通则规定的生物制品残留DNA限度大多为不超过10 ng/剂，但对个别疫苗的残留DNA限定标准更严格，如甲型肝炎灭活疫苗中的DNA残留量不得超过100 pg/剂，乙型肝炎疫苗中的DNA残留量不得超过10 pg/剂。

• 《中国生物制品规程》中规定rDNA含量每剂量应不高于10ng。《中国药典》2020版(三部)中提出需采用适宜的方法对生物制品中的宿主DNA进行检测，限定标准在各论中多为小于10ng/剂。

对于外源性DNA残留量的检测方法，《中国药典》2020年版通则中，收录了DNA探针杂交法和荧光染料法、定量PCR法三种，其中DNA探针杂交法，耗时较长且灵敏度较低，只可定量检测至微克与纳克级别。荧光染料法，不具有序列特异性，所以容易受到其他DNA序列的干扰。且灵敏度低，以PicoGreen染料法为例，仅能检测0.2ng/mL的纯DNA溶液。而实时定量PCR法是一种灵敏度高、特异性强且可通过实时监控进行定量的核酸检测技术，目前常用的有两种化学物质，一种是基于双链DNA的结合染料，如SYBR Green，但其与DNA亲和力强，通常对PCR反应有抑制作用；另一种是TaqMan®技术，此技术特异性强，灵敏度较高，它的定量范围也最宽，可以从微克级别跨越至飞克级别。

君研生物依据《美国药典》<509>通则和<1130>以及《中国药典》通则<3407>中的各种检测方法，最终选择荧光探针（TaqMan®）qPCR法作为细胞残留DNA检测的方法。该方法具有特异性强、灵敏度高等特点，在目前生物制药细胞核酸残留检测中被广泛使用。

依据此原理，君研生物自主研发了PG13残留DNA（qPCR）检测试剂盒。

本试剂盒配套有PG13 DNA定量参考品可快速准确定量检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中PG13残留DNA。试剂盒的检测范围为：300 pg/µL-0.003 pg/µL。本试剂盒可与君研生物宿主细胞残留DNA样本前处理试剂盒以及全自动核酸提取仪配套使用。样本经过前处理提取后用此试剂盒可以更高效、快速、准确地检测PG13细胞宿主DNA。

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关于君研生物

       君研生物科技（山西）有限公司成立于2021年，作为独立创新的研发、生产和销售一体型企业，君研专注于为生物医药产业提供符合国际标准的质量安全检测产品和服务。公司位于山西省太原市综改示范区，由海归科学家与业内资深专家领队，建设有 ~3200 平米符合 cGMP 标准和 ISO 13485:2016 体系要求的研发生产基地。

       君研生物致力于在CGT药企、抗体药、疫苗等领域提供专业合规的工艺杂质残留、宿主细胞核酸及蛋白残留、含量测定、外源污染物检测等产品和服务。结合医药产业发展需求，公司特色的快速即用型检测开发技术已经覆盖20多种检测试剂盒系列产品，拥有专利类知识产权 10 余项。作为助力您成功的生物安全检测合作伙伴，君研生物始终坚持生物原料中国造，为生物医药安全提供国际品质的产品和专业的技术服务。

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