科研干货 | AAV知多少？

腺相关病毒（adeno-associated virus，AAV），是目前发现的一类结构最简单的单链DNA缺陷型病毒，其基因组DNA小于5 kb，无包膜，外形为裸露的20面体颗粒。重组腺相关病毒（Recombinant AAV，rAAV）是在AAV基础上进行基因工程改造，剔除了AAV基因组全部编码蛋白基因序列，只在两端保留作为包装信号的反式DNA序列。复制型腺相关病毒（Replication Competent AAV，rcAAV），在rAAV载体生产过程中，转染用质粒DNA与rAAV会由于物理接近而发生非同源重组，这些重组序列被误包后就形成了具有复制能力的AAV，即rcAAV，rcAAV颗粒可能会影响rAAV基因表达。

1）相较于其他载体，AAV安全性很高，是RG1（最安全级别）的基因治疗载体，完全无具有潜在致病性。而其他载体如腺病毒是RG1，慢病毒是RG2，逆转录病毒是RG3；

2）感染宿主广，可以感染分裂细胞和非分裂细胞；

3）感染扩散能力强，有十几种血清型，具有较高的组织特异性，对肌肉、肝脏、神经组织等感染效率高；

4）可在体内长期稳定表达。

AAV病毒广泛应用于基因治疗领域，已有超过250多种AAV基因治疗临床项目在全球范围开展。作为开发基因治疗药物的重要载体，必须要进行严格的质量控制，包括鉴别、含量、纯度及杂质、效价、安全性和理化性质检验。检测方法见下表：

病毒含量检测分为基因组滴度、病毒颗粒数和感染滴度检测项。滴度是衡量病毒颗粒量的多少，是对病毒进行评价的单位。准确的滴度测定是AAV基因治疗药物质控的重要组成部分，也是开展临床前研究和临床研究的前提条件，稳定可靠的滴度才能保证准确给药剂量，更好地指导临床用药。根据AAV滴度测定不同原理，可以将其分为物理滴度测定和生物学滴度测定两大类，物理滴度包括病毒颗粒滴度（或衣壳滴度）和基因组滴度；生物学滴度包括感染滴度和转导滴度等。

在测定AAV的含量时，通常采用基因组滴度或者衣壳滴度作为单位，其中基因组滴度为携带基因组的AAV的浓度，衣壳滴度为AAV物理颗粒的浓度。基因组滴度一般采用qPCR、ddPCR等方法来测定；衣壳滴度主要是通过ELISA、HPLC等方法来测定。在感染滴度方面，金标准是采用TCID 50 细胞体外感染的方法，大多企业也会选择自建方法。

安全性检查包括无菌检查、细菌内毒素检查、支原体、rcAAV、异常毒性检查等。2020版中国药典中要求：基因治疗产品的病毒安全性控制应在风险评估的基础上，重点考虑对细胞基质、菌毒种、原材料和辅料的病毒污染来源进行控制。采用病毒为载体的基因治疗产品，还应建立与病毒载体特性及生产工艺特点相适应的病毒风险评估和控制要求，如对非复制型病毒载体生产工艺应关注产生复制型病毒的风险和控制，复制型病毒载体生产应关注产生野生型病毒的风险和控制。

君研生物研发的支原体 DNA（qPCR）检测试剂盒，专一性强，灵敏度高，可用于定性检测是否存在支原体污染。

关于君研生物ABOUT JUNYAN

君研生物科技（山西）有限公司成立于2021年，作为独立创新的研发、生产和销售一体型企业，君研专注于为生物医药产业提供符合国际标准的质量安全检测产品和服务。公司位于山西省太原市综改示范区，由海归科学家与业内资深专家领队，建设有 ~3200 平米符合 cGMP 标准和 ISO 13485:2016 体系要求的研发生产基地。

君研生物致力于在CGT药企、抗体药、疫苗等领域提供专业合规的工艺杂质残留、宿主细胞核酸及蛋白残留、含量测定、外源污染物检测等产品和服务。结合医药产业发展需求，公司特色的快速即用型检测开发技术已经覆盖20多种检测试剂盒系列产品，拥有专利类知识产权 10 余项。作为助力您成功的生物安全检测合作伙伴，君研生物始终坚持生物原料中国造，为生物医药安全提供国际品质的产品和专业的技术服务。

君研生物科技（山西）有限公司经专业机构 北京国医械华光认证有限公司 评审专家的严格审核后，顺利通过GB/T 42061-2022 idt ISO13485:2016医疗器械质量管理体系认证，体系覆盖产品设计开发、生产和服务全过程，并且获得认证证书。

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