从慢病毒到P24，生物药质控中的滴度检测

相关背景

慢病毒是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础改造的病毒，是反转录病毒科的一种，区别于一般的逆转录病毒载体，有更广的宿主范围，对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力，能高效的将外源基因或外源的 shRNA 有效地整合到宿主染色体上来实现目的序列的持久性表达，被广泛地应用于表达RNAi的研究中，也是基因治疗中常用的病毒载体。

慢病毒的物理滴度

随着基因细胞疗法的快速发展和广泛研究，慢病毒的临床应用需求在不断增长。病毒包装结束后，病毒的转导效率是影响后续使用效果的关键，对病毒滴度的快速检测就显得尤为重要。p24是 HIV 病毒颗粒的主要结构蛋白，在病毒的包装和成熟过程中起到关键作用。p24蛋白的氨基酸序列在 HIV中高度保守，倘若p24缺失则会导致病毒无法正常组装成功。

研究表明，每个慢病毒大约含有2000个p24蛋白分子，1ng的p24相当于1.25×10⁷个慢病毒物理颗粒（LP）。因此，通过测定慢病毒中含有的P24蛋白含量即可转换得到慢病毒的物理滴度。

慢病毒质控相关法规

中检院与CDE发布的《CAR-T 细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》和《基因治疗产品药学研究与评价技术指导原则》等相关指导原则中明确指出: 慢病毒载体中需要通过p24抗原含量检测病毒载体的颗粒数量。

2022年05月颁布了《体外基因修饰系统药学研究与评价技术指导原则(试行)》，对慢病毒载体质量研究与控制有着全面的要求，指出应考虑采用流式检测、ELISA及 qPCR 等多方法进行病毒滴度检测，并积极探寻不同检测方法间检测数值的相关性。

君研生物从市场需求出发，自主研发了慢病毒滴度（HIV-1 P24）检测试剂盒，采用双抗体夹心ELISA法测定HIV-1 p24蛋白，从而实现慢病毒滴度的快速检测。

慢病毒滴度（HIV-1 P24）检测试剂盒

产品信息

试剂盒优势

1. 线性范围宽，标曲范围为0.067-15ng/mL，样品稀释难度降低，实验误差小
2. 全过程只需要1h 15min，高效便捷
3. 特异性强，与其他非目标蛋白无交叉反应
4. 性能优越，准确度高，重复性好

性能指标

检测范围

以标准品HIV-P24蛋白浓度为横坐标，光吸收校准值为纵坐标，绘制标准曲线，使用四参数 Logisitic 数学模型拟合方程，检测范围在0.067-15ng/mL，R²可达0.99。

准确度

选择高中低三个浓度，分别测定3次，结果见下表，测量偏差 ≤10%。

精密度

选择高低两个浓度，分别测定3次，结果见下表，测量偏差 ≤5%

优势对比

①同类型试剂盒稀释样品难易程度 

②同类型试剂盒检测时间比对

关于君研

君研生物科技（山西）有限公司成立于2021年，作为独立创新的研发、生产和销售一体型企业，君研专注于为生物医药产业提供符合国际标准的质量安全检测产品和服务。公司位于山西省太原市综改示范区，由海归科学家与业内资深专家领队，建设有 ~3200 平米符合 cGMP 标准和 ISO 13485:2016 体系要求的研发生产基地。

君研生物致力于在CGT药企、抗体药、疫苗等领域提供专业合规的工艺杂质残留、宿主细胞核酸及蛋白残留、含量测定、外源污染物检测等产品和服务。结合医药产业发展需求，公司特色的快速即用型检测开发技术已经覆盖20多种检测试剂盒系列产品，拥有专利类知识产权 10 余项。作为助力您成功的生物安全检测合作伙伴，君研生物始终坚持生物原料中国造，为生物医药安全提供国际品质的产品和专业的技术服务。

君研生物科技（山西）有限公司经专业机构 北京国医械华光认证有限公司 评审专家的严格审核后，顺利通过GB/T 42061-2022 idt ISO13485:2016医疗器械质量管理体系认证，体系覆盖产品设计开发、生产和服务全过程，并且获得认证证书。